WB实验流程一 样本制备1.1蛋白提取： 使用ripa裂解液进行细胞蛋白提取：使用4℃预冷PBS洗净后按照六孔板或者每106细胞加入150ul预冷RIPA裂解液的比例加入裂解液（预先加入蛋白酶抑制剂...

WB背景高的原因有哪些原因解决办法抗体浓度太高优化/降低一抗和二抗的浓度抗体孵育温度过高4℃孵育二抗非特异性结合或与封闭剂交叉反应设置二抗对照(不加一抗),降低二抗浓度一抗或二抗与封闭剂有交叉反应在孵...

一、细胞的采集、处理和保存 1、细胞板贴壁细胞收集： 细胞弃培养上清，预冷PBS轻柔洗涤保证完全去除培养基，加少量预冷的PBS用细胞刮刀将细胞收集于冻存管，4℃1500rpm离心去除上清后得到细胞，...

一、配胶注意事项1、需留意配胶试剂的有效期和清澈度，一旦发现沉淀或结晶，要及时更换。2、需注意pH8.8Tris-HCl和pH6.8Tris-HCl可能会产生沉淀，根据需要选择1.0M或1.5M的浓度...

一、蛋白提取：1.明确所检测目的蛋白的表达情况，了解所研究蛋白的特点，正确选择和处理样本。2.蛋白提取是WB实验的开端，裂解液的选择、样本的破碎方法、温度和变性等都会影响样本蛋白是否提取成功。3.蛋白...

一． 高背景1. 原因：封闭不好，一抗浓度高，洗膜时间和次数不够；2. 优化：增加封闭时间，降低一抗浓度，增加洗膜时间和次数；3. 解析：高背景是 WB 中最常见出现的问题，如果目的条带单一清晰，其他...